Раз в месяц мы отправляем дайджест с самыми популярными статьями.

ВЛИЯНИЕ ТЕТРАХЛОРМЕТАНА НА СОСТОЯНИЕ ПРОЦЕССОВ ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ КРОВИ И ПЕЧЕНИ КРЫС

С.Ю. Большухин, С.П. Перетягин, А.К. Мартусевич, А.Г. Соловьева

ФГБУ «Приволжский федеральный медицинский исследовательский центр» Минздрава России

Заболевания печени представляют собой актуальную проблему современного здравоохранения, как в России, так и в мире в целом. В их структуре наибольшую распространенность получили гепатиты вирусной этиологии и алкогольное поражение печени [2, 8]. Рассматриваемая патология имеет большое клинико-социальное значение вследствие инвалидизации и высокой смертности в основном трудоспособного населения, больших финансовых затрат, связанных с лечением и реабилитацией пациентов [4, 5]. Наряду с этим, наблюдается увеличение частоты тяжелых форм течения гепатитов с высоким риском формирования хронического поражения печени [5, 8].

Возникновение и развитие патологических процессов в печени зависит от этиологических факторов, но имеет единый механизм повреждения – активацию процессов липопероксидации [2-4, 10]. Хотя начальные этапы генерации активных форм кислорода при разных заболеваниях могут отличаться, но далее сдвиги свободнорадикальных процессов теряют свою специфичность и зависят только от состояния и степени мобилизации антиоксидантной защиты [1-5,]. Это подтверждают и иностранные авторы, которые рассматривают перекисное окисление липидов как один из универсальных механизмов повреждения клеток, в том числе печени [9, 10]. Известно, что тетрахлорметан (ТХМ) и продукты его метаболизма являются мембранотропными ядами [3, 4]. Следовательно, поражение тетрахлорметаном приводит к дисбалансу в системах липопероксидации и антирадикальной защиты организма [3, 5].

Цель исследования – изучение состояния липопероксидации крови и печени крыс при экспериментальном токсическом поражении печени, вызванном различными дозами тетрахлорметана.

Материал и методы исследования

Экспериментальные исследования проведены на 60 белых линейных крысах-самцах линии Вистар (масса тела 180-210 г.). Все животные содержались в стандартных условиях вивария в клетках при свободном доступе к пище и воде на рационе питания, соответствующем ГОСТ «Содержание экспериментальных животных в питомниках НИИ» (1978). Моделировали острый токсический гепатит (4 и 8 подкожных инъекций четыреххлористого углерода (CCl4) в виде 66% масляного раствора в дозе 0,2 мл на 100 г массы тела животного), хронический токсический гепатит (20 инъекций CCl4) и цирроз печени (64 инъекции CCl4). Введение CCl4 осуществляли через сутки.

Материалом исследования служили кровь и печень крыс. Взятие биоматериала проводили в утренние часы после декапитации животных под эфирным наркозом. Определяли концентрацию промежуточных (диеновые конъюгаты – ДК) и конечных (малоновый диальдегид – МДА) продуктов липопероксидации [1]. МДА выделяли из эритроцитарных мембран изопропиловым спиртом [6]. Методика определения МДА в гомогенате печени аналогична его определению в мембранах эритроцитов. Липидную фракцию для определения ДК в эритроцитах крови и гомогенатах печени, экстрагировали гептан-изопропаноловой смесью методом, модифицированным П.И. Цапок с соавт. (1999) [6]. Изменения исследуемых показателей анализировали через 1 и 10 суток после последней инъекции ТХМ. Оценку интенсивности перекисного окисления производили путём измерения хемилюминесценции (ХЛ), инициированной Н2О2 в присутствии избытка ионов двухвалентного Fe, на хемилюминометре EMILITE EL 1105 [1].

Данные обработаны методами вариационной статистики с применением критерия Mann-Whitne.

Результаты исследования

В условиях моделирования острого гепатита достоверные изменения содержания ДК в плазме крови выявлены лишь при интоксикации 8 инъекциями CCl4. В этом случае через 1 сутки после его отмены наблюдали достоверное снижение содержания ДК в биосреде по отношению к интактным животным (на 60,9%; р<0,05). Через 10 суток данный показатель увеличивался, но оставался ниже контрольного уровня на 38,1% (р<0,05). В группе интактных крыс через 10 суток значимых изменений содержания ДК не обнаружено.

Более значимое снижение содержания ДК в первой контрольной точке наблюдается при развитии хронического токсического гепатита (ХГ) и цирроза печени (ЦП), моделируемых 20 и 64 инъекциями ТХМ соответственно. При этом максимальное снижение уровня показателя относительно интактных животных (на 76%; р<0,05) выявлено при ХГ, а при ЦП уровень параметра снижался на 48,2% (р<0,05).

Через 10 суток после отмены CCl4 содержание ДК в плазме крови при ХГ восстанавливается практически до нормы, а при ЦП нормализации данного показателя не происходит, а наблюдается его снижение до следовых количеств (0,01±0,002 усл. ед/л; р<0,01) (рис. 1). Таким образом, восстановление содержания ДК в плазме крови в первые 10 суток после отмены токсина зависит от тяжести интоксикации (уровень корреляционной связи высокий, коэффициент корреляции r=-0,79).

Рис. 1. Изменение содержания ДК плазмы крови крыс в зависимости от степени тяжести интоксикации тетрахлорметаном

 

Через 1 сутки после завершения моделирования патологии достоверные изменения ДК эритроцитов наблюдаются лишь при ХГ и ЦП, что проявляется снижением данного показателя на 38,3% (р<0,05) и на 25% (р<0,05) по отношению к интактным животным (рис. 2). При этом обнаружена обратная зависимость средней силы между содержанием ДК и тяжестью интоксикации (r=–0,37).

Через 10 суток после отмены CCl4 содержание ДК в эритроцитах у крыс с ХГ было ниже, чем в интактной группе, на 77,9% (р<0,01), а при ЦП данный показатель снижался до следовых количеств (0,04±0,02 усл. ед/г; р<0,01). При этом выявлена отрицательная корреляционная зависимость высокой силы между содержанием ДК эритроцитов и выраженностью интоксикации (r=–0,81).

Наиболее выраженное достоверное повышение содержания ДК в условиях интоксикации CCl4 выявлены в гомогенате печени крыс через 1 сутки после отмены введения токсина. Так, после 4 инъекций CCl4 содержание ДК увеличилось на 83,1% (р<0,05), после 8 инъекций CCl4 – на 152,5% (р<0,05), после 20 инъекций – в 1,9 раза (р<0,01), а после 64 инъекций – в 2,4 раза (р<0,01). Также установлено, что между содержанием ДК в гомогенате печени и выраженностью интоксикации существует зависимость средней силы (r=+0,66). Через 10 суток после отмены CCl4 содержание ДК в гомогенате печени животных всех опытных групп снижается до нормы (рис. 3).

Рис. 2. Динамика содержания ДК в эритроцитах с учетом степени интоксикации тетрахлорметаном

 

Рис. 3. Изменение содержания ДК гомогената печени крыс в зависимости от степени токсического поражения тетрахлорметаном

Рис. 4. Концентрация МДА плазмы крови крыс в динамике тетрахлорметановой интоксикации

 

Рис. 5. Изменение содержания МДА эритроцитов крови крыс в зависимости от степени токсического поражения тетрахлорметаном

 

При анализе содержания МДА в плазме крови через 1 сутки после завершения курса введения ТХМ ни в одной группе животных достоверных изменений параметра по отношению к интактным животным не выявлено (рис. 4). Через 10 суток после завершения моделирования патологии достоверное снижение данного показателя по отношению к интактным животным обнаружено лишь при токсическом ЦП (р<0,01). Выявленная тенденция к снижению уровня МДА при нарастании тяжести интоксикации ТХМ подтверждена соответствующей корреляцией (r = –0,84).

В эритроцитах через 1 сутки после отмены CCl4 достоверные изменения содержания МДА выявлены в модели ХГ (рис. 5). В этом случае указанный показатель снижался на 36% по отношению к интактным животным (p<0,05). Через 10 суток после отмены CCl4 значение параметра не отличалось от нормального уровня. При этом наблюдается умеренная обратная корреляция между содержанием МДА эритроцитов крови крыс и тяжестью моделируемой интоксикации (r = –0,44). В других группах животных значимых изменений содержания МДА в эритроцитах крови крыс не выявлено (рис. 5).

 

Рис. 6. Динамика содержания МДА в гомогенате печени в зависимости от степени токсического поражения тетрахлорметаном

 

Наиболее выраженные изменения содержания МДА и ДК при интоксикации крыс тетрахлорметаном выявлены в гомогенате печени. Так, через 1 сутки после 4 инъекций CCl4 выявлено повышение содержания МДА по в 2,82 раза отношению к уровню интактных животных (р<0,05), после 8 инъекций – в 4,77 раза (р<0,05), после 20 инъекций – в 5,3 раза (р<0,05), а – после 64 инъекций CCl4 – в 6,1 раза (р<0,05). Следует отметить, что между содержанием МДА и степенью интоксикации выявлена прямая сильная корреляция (r=+0,7).

Через 10 суток после завершения введения токсина происходит снижение содержания МДА, сохраняясь на уровне выше нормального на 75% после 4 инъекций тетрахлорметана (р<0,05), после 8 инъекций CCl4 – на 123% (р<0,05), после 20 инъекций – на 222% (р<0,05), а после 64 инъекций – на 290% (р<0,05). (рис. 6). Между концентрацией МДА и выраженностью интоксикации выявлена прямая зависимость, приближающаяся к сильной (r = +0,69).

Заключение

Интоксикация тетрахлорметаном приводит к существенному сдвигу процессов липопероксидации в ранние сроки после введения токсина. Наиболее выраженная активация липопероксидации наблюдается в гомогенате печени крыс, подвергшихся интоксикации. В целом, введение тетрахлорметана вызывает выраженные дозозависимые нарушения структурно-функционального состояния печени, триггерным механизмом которых является усиление процессов липопероксидации.

 

Список литературы:

  1. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма. СПб.: ИКФ «Фолиант», 2000. 104 с.
  2. Буеверов А.О. Оксидативный стресс и его роль в повреждении печени // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2002. №4. С. 21-25.
  3. Венгеровский А.И., Батурина П.О., Чучалин B.C. Роль перекисного окисления липидов в механизме пролиферации фиброзной ткани печени при экспериментальном хроническом гепатите // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1996. №2. С. 37-39.
  4. Саратиков А.С., Венгеровский А.И. Влияние гепатопротекторов, содержащих фосфолипиды, на зависимую от цитохрома Р-450 антитоксическую функцию печени при экспериментальном токсическом гепатите // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999. Т. 127, №4. С. 392-394.
  5. Скровцов В.В. Пероксидация липидов и антиоксидантная система в гепатологии // Гепатология. 2003. №3. С. 7-13.
  6. Цапок П.И. Метод обработки эритроцитарных мембран для биохимических исследований // Информационный листок Кировского ЦНТИ № 72-99. Киров. 1999. 3 с.
  7. Шилова И.В., Жаворонок Т.В., Суслов Н.И., Новожеева Т.П., Мустафин Р.Н., Лосева А.М. Гепатозащитные свойства фракций экстракта лабазника вязолистного при экспериментальном токсическом гепатите // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006. Т. 146, №7. С. 54-57.
  8. Liss G., Lewis J.H. Drug-induced liver injury: what was new in 2008? // Expert Opin Drug Metab Toxicol. 2009. Vol. 5, №8. Р. 843-860.
  9. Morita M., Akai S., Hosomi H., Tsuneyama K., Nakajima M., Yokoi T. Drug-induced hepato-toxicity test using gamma-glutamylcysteine synthetase knockdown rat // Toxicol. Lett. 2009. Vol. 189, №2. Р. 159-165.
  10. Pera N., Phung N., Farrel G.C. Oxidative stress in hepatic fibrogenesis: implications from a nutritional model of nonalcoholic steatohepatitis // Hepatology. 1999. Vol. 30. P. 493-494.

Новости: Ассоциация Российских Озонотерапевтов

Нобелевская премия по физиологии и медицине — 2019

В 2019 году Нобелевской премии в области физиологии и медицины удостоены американцы Уильям Кэлин и Грегг Семенза, а также британец Питер Рэтклифф. Согласно официальной формулировке Нобелевского комитета, лауреаты отмечены «за открытие механизмов, посредством которых клетки воспринимают доступность кислорода и адаптируются к ней»

Более подробная информация

Официальное объявление Скачать

Конференция в Арубе по передовым технологиям озонотерапии в Медицинском Университете Ксавье 23- 26 апреля 2020 г.

«Озон без границ» - настоящее Общество по озону и неправительственная организация с гордостью представляют Конференцию по усовершенствованным технологиям медицинской озонотерапии в Арубе 2020 года!

Конференция в Турции

В Турции, город Шанлыурфа 10 - 12 сентября 2019 г. состоялась научно-практическая конференция по озонотерапии. Ознакомиться с пост-релизом Конференции можно здесь Скачать

VIII  Азиатско-Европейская  научно-практическая конференция

«ОЗОН  И ДРУГИЕ МЕДИЦИНСКИЕ ГАЗЫ В БИОЛОГИИ И ТЕРАПИИ» состоялась  в Польше, Штутово 10 - 12 сентября 2019 г. Ознакомиться с пост-релизом Конференции можно здесь Скачать

Новый выпуск журнала

Вышел в свет первый в 2019 году выпуск журнала "Биорадикалы и антиоксиданты" (т.6. №2)

Озонотерапия и алкогольное поражение печени

Клинически подтвержденные в диссертации Н.Э. Жуковой результаты об эффективности озонотерапии у пациентов с алкогольным абстинентным синдромом дополнены сведениями о протективном действии озона в отношении печени при экспериментальном ее алкогольном поражении Скачать

Изучено действие озона на листерий

Доказана бактерицидная активность озонированной воды на примере различных штаммов листерий. Показана дезинфицирующая активность данного агента Скачать

Озонотерапия при болевом синдроме

Проводимые Ассоциацией исследования в области озонотерапии болевого синдрома подтверждаются недавно опубликованными данными мировой литературы Скачать

Конференция в Польше

10 - 12 cентября 2019г. на побережье Польской Балтики состоится VIII Азиатско-Европейская научно-практическая конференция «Озон и другие медицинские газы в биологии и терапии». Ознакомиться с информационным письмом можно здесь

Озонотерапия при боли в спине

В журнале Acta reumatologica Portuguesa опубликован систематический обзор по применению озонотерапии при боли в спине. Скачать обзор можно здесь

Конференция в Коста-Рике

4 — 7 апреля 2019 года в Коста-Рике состоится Конгресс «Ozone without borders». Ознакомиться с информацией

Озонотерапия в паллиативной медицине

Опубликован краткий обзор по применению озонотерапии на этапе паллиативной помощи. Скачать обзор можно здесь

Новости: Защита диссертаций

Мартусевич Анастасия А.: Метаболические и гемодинамические эффекты синглетного кислорода

ПОЗДРАВЛЕНИЕ!
11 июня в Казани членом АРО, Мартусевич Анастасией Анатольевной (зав.редакцией журнала «Биорадикалы и антиоксиданты», зав. Учебным отделом ЧОУ «Озонотерапия» АРО) была защищена кандидатская диссертация на тему «Метаболические и гемодинамические эффекты синглетного кислорода». Ассоциация Российских Озонотерапевтов поздравляет Анастасию Анатольевну с успешной защитой! С авторефератом диссертации можно познакомиться здесь:
Скачать

 

Аппараты для озонотерапии